Далее вновь синтезированный капсидный белок присоединяется к реплицированным копиям геномной РНК, что приводит к образованию нуклеокапсидов. Белки внешней оболочки включаются в мембрану эндоплазматической сети и там гликозилируются, потом транспортируются к комплексу Гольджи, где подвергаются дополнительному гликозилированию, и затем переносятся к цитоплазматической мембране. Проходя сквозь нее, нуклеокапсиды обволакиваются участком мембраны, сильно обогащенным белками внешней оболочки, которые встроены в липиды клетки-хозяина. Далее происходит отпочковывание нуклеокапсида таким образом, что, отделяясь от поверхности клетки, он оказывается окруженным замкнутым суперкапсидом.
Лабораторная диагностика – см. разделы «Флавивирусы», «Клещевой энцефалит».
Флавивирусы во многом сходны с альфа-вирусами и по предыдущей классификации в качестве самостоятельного рода входили в состав семейства тогавирусов. Геномная РНК одноцепочечная, линейная, позитивная, ее молекулярная масса 4,0 – 4,6 МД. Диаметр сферических вирионов 40 – 50 нм, иногда 25 – 45 нм (вирус клещевого энцефалита). Строение вирионов принципиально не отличается от такового у альфа-вирусов, но у флавивирусов капсидный белок имеет меньшую молекулярную массу (13,6 кД вместо 30 – 34 кД), а шипы состоят всегда из двух белков, только один из них гликозилирован (Е1) и обладает гемагглютинирующей активностью.
По результатам РПГА все флавивирусы (около 50 серотипов) делят на 4 подгруппы: клещевого энцефалита, японского энцефалита (в том числе лихорадки Западного Нила), желтой лихорадки и лихорадки денге. Важная особенность флавивирусов – наличие растворимого антигена, обладающего типоспецифической активностью в РСК; это неструктурный белок, который образуется в инфицированных клетках в процессе репродукции.
Внутриклеточная репродукция флавивирусов протекает медленнее, чем альфавирусов, но проходит те же стадии с некоторыми отличиями: в инфицированных клетках обнаруживается только один класс мРНК – 45S; репликация вирионной РНК происходит на ядерной оболочке, а созревание вириона идет почкованием через мембраны эндоплазматической сети.
Альфа-вирусы инактивируются протеазами, в то время как флавивирусы устойчивы к ним.
Тогавирусы нестабильны при комнатной температуре, но сохраняются при –70 °C. Легко инактивируются эфиром и дезоксихолатом натрия. Патогенны для различных животных, инфекция легко воспроизводится на мышах при внутримозговом заражении. Особо восприимчивы новорожденные мыши. У чувствительных позвоночных хозяев первичное размножение вируса происходит в миелоидной, лимфоидной ткани или в эндотелии сосудов. Размножение в ЦНС зависит от способности вируса проходить через гематоэнцефалический барьер и инфицировать нервные клетки.
Вирусы размножаются в курином эмбрионе при заражении в желточный мешок или аллантоисную полость. Они хорошо размножаются в культурах клеток почек обезьян и фибробластов куриных эмбрионов, вызывая очаговую мелкозернистую дегенерацию.
Патогенез и клиника. После проникновения через кожу при укусе переносчиком вирус попадает в кровяное русло или лимфатические сосуды. Местом первичного размножения большинства тогавирусов являются эндотелий сосудов и ретикулоэндотелиальные клетки лимфатических узлов, печени, селезенки. После 4 – 7 дней инкубационного периода вирус выходит в кровь. Многие инфекции имеют вторую фазу – локальное размножение вируса в избранных органах: печени, мозге, почках. Первая фаза сопровождается лейкопенией, вторая – лейкоцитозом. Заболевание возникает обычно внезапно, начало его совпадает с выходом возбудителя в кровь.
Неизменным признаком является лихорадка, сопровождающаяся головной болью, миалгией, ломотой в суставах, тошнотой, часто мелкоточечной сыпью и увеличением лимфатических узлов. В значительном числе случаев клинические проявления ограничиваются периодом диссеминации вируса, за которым следует выздоровление без последствий. Лихорадка может осложняться геморрагическими симптомами, обусловленными сосудистыми нарушениями. Появляются кровоточивость слизистых оболочек, геморрагическая сыпь. Лихорадка может иметь двухволновое течение: после короткой ремиссии вновь появляются лихорадка и новые симптомы (альбуминурия, желтуха, менингеальные симптомы, энцефалит, миелит), свидетельствующие о поражении различных органов.
Клещевой энцефалит – заболевание, которое регистрируется в России от Приморья до западных границ в лесной зоне, т. е. местах обитания переносчиков – иксодовых клещей. Как самостоятельная нозологическая единица был выделен в 1937 г. в результате работы в сибирской тайге комплексной экспедиции, возглавляемой Л. А. Зильбером. В составе экспедиции работали видные вирусологи (М. П. Чумаков, В. Д. Соловьев), клиницисты, эпидемиологи. В течение 3 мес. была установлена вирусная природа заболевания, определены особенности вируса и основные эпидемиологические закономерности, в том числе природная очаговость, сезонность в связи с активностью клещей. Одновременно были описаны особенности клиники и патоморфологии клещевого энцефалита, разработаны некоторые пути профилактики и терапии. Дальнейшие исследования этого заболевания показали его распространенность не только у нас в стране, но и за рубежом. Со времени выделения вируса клещевого энцефалита было обнаружено более 500 его штаммов. По степени патогенности для мышей, отношению к культурам ткани фибробластов куриных эмбрионов и другим показателям они были разделены на 3 группы. В третью группу включены слабовирулентные штаммы.
В соответствии с видом переносчика различают два основных типа вируса клещевого энцефалита: персулькатный, восточный (переносчик Ixodes persulcatus) и рицинусный, западный (переносчик Ixodes ricinus). Изучение нуклеотидной последовательности геномной РНК у представителей восточного и западного типов вируса выявило у них 86 – 96 % гомологии. В последние годы в Греции из клещей Rhipicephalus bursa был выделен третий тип вируса. По клиническому течению различают два основных варианта заболевания: восточный, протекающий более тяжело, и западный, имеющий более легкое течение.
Примерно в 80 % случаев заражение происходит трансмиссивным путем при укусе клещей и в 20 % случаев – алиментарным путем при употреблении сырого козьего, коровьего или овечьего молока. Известны также случаи лабораторного заражения. Чаще заболевают дети дошкольного и школьного возрастов, а также работники геологических партий.
Инкубационный период от 1 до 30 дней, чаще 7 – 12 дней от момента присасывания клеща. Начало заболевания обычно острое: озноб, сильная головная боль, подъем температуры до 38 – 39 °C, тошнота, иногда рвота, боли в мышцах, их подергивание, развиваются менингеальные знаки.
Различают три основные формы клещевого энцефалита – лихорадочную, менингеальную и очаговую. Лихорадочная форма составляет 30 – 50 %, признаков менингита нет, исход благоприятный, астения наблюдается нечасто. Менингеальная форма составляет 40 – 60 % заболеваемости, характеризуется менингеальным синдромом с изменениями в ликворе, лихорадка может иметь двухволновый характер, постинфекционный астенический синдром отмечается у 40 % переболевших. Очаговые формы наблюдаются реже (8 – 15 %), характерными признаками являются менингеальные симптомы и очаговые поражения нервной системы разной степени выраженности, сопровождаемые параличами, потерей чувствительности и иной неврологической симптоматикой, поражением стволовых отделов мозга, что ведет к нарушению дыхательной и сердечной деятельности. Летальность высокая, после болезни остаются стойкие осложнения.
Лабораторная диагностика осуществляется в основном вирусологическим и серологическим методами. Вирус выделяют из крови, ликвора, мочи, реже носоглоточных смывов, испражнений и секционного материала при заражении культур клеток. Типируют вирус в различных вариантах реакции биологической нейтрализации вируса. При серологическом методе обнаруживают специфические в отношении вируса антитела в РСК, нейтрализации, РТГА, иммуносорбентных реакциях.
Лечение симптоматическое. Для профилактики заболевания используют убитую культуральную вакцину.
Японский энцефалит – природно-очаговое заболевание, передающееся комарами рода Culex и других родов подсемейства Culicinae. Впервые вирус был выделен в 1933 г. японским ученым М. Хаяши, в России он впервые выделен в 1938 г. во время работы комплексной экспедиции в Приморье А. К. Шубладзе (1940) и А. А. Смородинцевым и В. Д. Неустроевым (1941). Заболевание распространено на юге Восточной Азии, особенно в Японии, где заболеваемость нередко достигает 250 на 100 000 населения. В России японский энцефалит регистрируется в южных районах Приморья. В природе вирус сохраняется не только у членистоногих, но и у различных видов птиц и летучих мышей. Заболевания японским энцефалитом выявляются исключительно в летне-осенний период. Это одно из самых тяжелых заболеваний с наиболее высокой летальностью, составляющей от 20 до 70 и даже 80 %, чаще у лиц пожилого возраста и женщин.
