обойдется вам дешевле.
Примечания: некоторые виды грибов не любят повышенную влажность при посеве на «косяки». (Например, Ильмовый Устричный гриб Н. Ulmarius). Вторая трудность состоит в том, что вы не можете также просто контролировать морфологию гриба, как при посевах на чашках Петри (изменение типичной морфологии гриба может указывать на возможное заражение культуры или выявить другие причины подавления роста мицелия). Также возникает определенная трудность в изоляции части мицелия для пересева на другие субстраты (это зависит от типа мицелиальной ткани, образуемой грибом на агаре).
Заливка косяков.
Как залить ряд косяков:
1. Отмерьте компоненты для агаровой среды в жестяную банку достаточного объема (250 мл. среды хватит, примерно, на 20 косяков). Сожмите край банки для формирования «носика», чтобы упростить процесс разливки.
2. Залейте в банку насчитанное количество воды и прикройте банку кусочком фольги.
3. Поместите банку в скороварку и пропарьте без давления в течение 10 минут. Затем закройте клапан скороварки и варите еще 10 мин. В эту же скороварку можно поместить и пробирки для заливки косяков.
4. Снимите скороварку с огня, и после небольшого охлаждения, сбросьте пар из скороварки (не сбрасывайте давление слишком резко, среда выплеснется из банки). Как только давление снизилось, вынимайте среду для разлива. Можете позволить ей слегка охладится, но не до застывания.
5. Добавьте перекись (1,5 мл. для 250 мл. агаровой среды) пастеризованной пипеткой (то есть погруженной на время в кипящую воду).
6. Залейте агар в пробирки тонкой струей, ни в коем случае не испачкав края пробирки. Держите пробку от пробирки в руке при разливе, прижимая ее мизинцем.
7. Закройте пробирку пробкой и установите пробирку на уклон для формирования косой поверхности и застывания среды.
Для легкого воспроизведения привожу рецепт, используемый мной среды для среды MYA (описан в первом томе).
∙ 10 г. агара.
∙ 12 г. порошка солода.
∙ 0,1 г. дрожжевого порошка.
∙ 0,5 г. зерновой муки (я делаю ротацию между пшеницей, рожью, рисом, овсом и просом).
∙ 0,5 г. корма для животных (кролика или любых других зверей). прессованных из опилок гранулы (для грибов плохо растущих на чистом агаре, количество гранул можно увеличить).
∙ 1 л. воды из под крана (pH воды нужно скорректировать небольшим количеством пищевой соды и уксуса в пределах 6–8)
Работа с культурой на «косяках»
Для прививки культуры и забора мицелия полезно иметь микробиологические петли из жесткой проволоки. Вы можете сделать микробиологическую петлю самостоятельно: сформируйте на конце проволоки маленькую петлю, другой конец проволоки пропустите через тонкую стеклянную трубку (3–3,5 мм в диаметре). Расплавьте на газовой горелке кончики трубки, вплавив (нихромовую или стальную) проволоку. Получится микробиологическая петля с стеклянной ручкой.
Для успешной прививки вы должны перенести на «косяк» микробиологической петлей кусочек агара с мицелием (если перенесенный кусочек мицелия с агаром слишком мал, или если вы захватили петлей часть мицелия без кусочка агара, то возможно мицелий не приживется на «косяке»). Если перенос мицелия не удался в первый раз, вы всегда можете попробовать перенести мицелий еще раз на этот же «косяк», сохранив стерильность среды, перекись в среде вам в этом поможет. При пересадке я захватываю микробиологической петлей минимально необходимый для прививки кусочек агара с мицелием. На первых порах это сделать непросто, но со временем у вас все получится. При манипуляциях с пробиркой, не забывайте прожигать в племени спиртовки горлышко пробирки и пробку.
Очистка мицелия на «косяках».
В первом томе «Выращивание грибов простым способом» я объяснил, как невидимое микробное загрязнение может расти на культуре мицелия выращенного методом с применением перекиси. Там же я представил метод очистки от этих загрязнений путем проращивания культуры мицелия через непитательный агар. На «косяках» невидимая инфекция должна расти немного медленнее, чем на чашках Петри. Но, в конечном счете, все равно происходит накапливание инфекции. Не существует удобного способа посева мицелия в основание агара в пробирке, поэтому мы используем другой путь. Этот метод состоит из заливки второго слоя агара, поверх вросшего мицелия. Таким образом, мицелию ничего не остается как прорости уже чистым через новый слой агара.
Вот как это делается:
1. Сделайте прививку мицелия на косой агар и дайте ему немного закрепиться на нем.
2. Приготовьте по прописи маленькое количество агаровой среды в жестяной банке с отогнутыми краями в виде носика (для удобства разлива по пробиркам среды).
3. После приготовления среды и охлаждения добавьте перекись по прописи и тщательно перемешайте.
4. Дождитесь остывания смеси почти до застывания, и в пламени спиртовки разлейте среду по пробиркам (пробирку можно покрыть слоем агара вертикально или сделать скос). Чем тоньше слой покрывающего агара, тем меньше времени потребуется мицелию для прорастания [62].
5. Закройте пробирку пробкой.
6. Поставьте пробирки в теплое место для инкубации.
Внимание! Вынимая очищенный мицелий для пересадки, не захватите петлей первый загрязненный слой.
Посев спор.
Я обычно убеждаю потенциальных грибников начинать их грибные исследования со здоровых, чистых культур, полученных от проверенных поставщиков. Такие культуры проверены и гарантировано дадут хороший урожай при культивации. Если вы потеряете свою культуру, вы всегда сможете взять у поставщика новую чистую линию. Если вы начинаете со спор, то нет никакой гарантии, что полученная вами мицелиальная культура будет плодоносить так же хорошо и будет иметь те же особенности, что и родительский гриб, от которого получены споры. Так же вы не будете знать оптимальные условия для роста мицелия, вам придется их искать самостоятельно. Если вы потеряете свою линию, вам придется начинать все сначала.
Однако есть и положительные аргументы. Культуры, полученные из спор, обычно более энергичны, чем мицелий, полученный из пересевов. Споры могут стоить мало или совсем ничего не стоить, а чистая мицелиальная культура может оказаться очень дорогой. Споры могут быть получены из высушенного гриба, в отличие от мицелия и т. д. Таким образом, получение линии из спор может быть использовано с тем же успехом, как и из чистой линии.
В предыдущей книге я писал, что споры не могут прорастать в среде содержащей перекись.
Я получил письма от нескольких грибников. Они писали мне, что им удалось прорастить споры в присутствии перекиси. Должен признать, что это действительно возможно, если концентрация вносимых спор велика. Однако не думаю, что это хорошая идея. Проросший в этих условиях мицелий может иметь генетические повреждения. И как оказывается не особенно трудно сделать проростку спор в неперекисной среде, несмотря на возможные заражения. При применении метода посева на «косяки» шанс заражения уменьшается до минимума по сравнению с чашками Петри (большое спасибо Дэвиду Сару за
