чистых каннабиноидов, как и других наркотиков, желательно иметь в каждой современной криминалистической лаборатории. Более всего они должны использоваться в научной медицине. Для проведения исследований в области высшей нервной деятельности человека (и животных) наряду с другими психотропными средствами необходимы и физиологически активные каннабиноиды. В настоящее время спрос на них не столь велик, но это объясняется только их трудной доступностью.
Получение в препаративных количествах отдельных компонентов гашиша возможно методом распределительной хроматографии на колонке с силикагелем, противоточным распределением по Кренгу, с помощью ГЖХ и другими путями.
Использование чисто химических приемов (например, дробная кристаллизация каннабиноидов в виде эфиров с последующим омылением) едва ли приемлемо для препаративных целей, так как они трудоемки. О разделении экстрактов разгонкой в вакууме уже отмечалось выше, при этом образование вторичных продуктов препятствует получению веществ в чистом состоянии. Ниже приводятся краткие описания важнейших методов препаративного разделения экстрактов гашиша, достаточные для уяснения их сущности.
5.1 Разделение на колонке
Разделение на колонке 400 г индийского гашиша исчерпывающе экстрагировались этиловым спиртом. Сырой экстракт (53 г) очищался через слой флоризила (500 г) с использованием бензола в качестве растворителя. Элюат собирался порциями по 10 мл. Всего получено 150 фракций; от каждой отбиралась капля, которая испытывалась на наличие фенольных соединений (с диазотированным бензидином). Фракции, показавшие положительную реакцию (от № 66 до № 110), объединялись, и растворитель отгонялся. В остатке было 15,9 г вязкого масла.
1 г этого масла вводился в колонку с 40 г силикагеля и хроматографировался в системе растворителей бензол-н-гексан-диэтиламин (25:10:1). По результатам анализа на пластинках в тонком слое силикагеля отобрано пять фракций:
1. КБД,
2. КБД+ТГК
3. КБД+ТГК+КБН
4. ТГК+КБН
5. КБН.
Фракции, содержащие смеси, повторно (шесть раз) хроматографироволись в тех же условиях. В итоге было получено: КБД-0,117 г, ТГК-0,231 и КБН-0,278 г. Вещества по физическим свойствам совпадали с описанными в литературе и были использованы в качестве «свидетелей» в тонкослойной и газовой хроматографии.
Оценивая описанный способ, нужно отметить прежде всего его длительность, трудоемкость и недостаточную продуктивность. Фракции не были строго индивидуальными веществами (за исключением КБН), а представляли собой смеси изомеров.
5.2 Газовая хроматография (ГЖХ)
В главе 4 было показано, что с помощью ГЖХ можно осуществлять весьма тонкое аналитическое разделение смеси каннабиноидов, включая и изомеры ТГК.
Если использовать тот же принцип в несколько модернизированном приборе, то можно получать чистые вещества и в препаративных количествах. К сожалению, техника ГЖХ еще не позволяет оперировать с большими навесками. Следует иметь в виду, что при увеличении количества разделяемой смеси с известного предела уменьшается точность. Однако, многократно повторяя опыт, можно накопить требуемое количество чистых веществ.
Возможное образование вторичных продуктов при высоких температурах ГЖХ в данном случае не умоляет достоинств метода. Хроматографировать можно не свободные фенолы, а более устойчивые их триметилсилиловые эфиры. Временная защита фенольных гидроксилов предохраняет каннабиноиды от разложения при нагревании и позволяет проводить более четкое разделение. Наиболее ценным составляющим гашиша является изомеры ТГК. Количество их увеличивается за счет разложения ТГКК и циклизации КБД. Таким образом, использование газовой хроматографии для препаративного разделения каннабиноидов следует считать возможным.
5.3 Препаративная бумажная хроматография.
Этот способ не может конкурировать с описанным выше ни по производительности, ни по точности разделения, однако его можно рекомендовать для получения трех важнейших каннабиноидов.
Приняв за основу более или менее удовлетворительное разделение каннабиноидов на бумаге, мы предложили использовать препаративный вариант.
Неочищенный метанольный (или этанольный) экстракт гашиша, упаренный примерно до концентрации 1:10, с помощь пипетки наносится в виде сплошной полосы на стартовую линию большого листа плотной бумаги для хроматографии (60x60 см), предварительно импрегнированной диметилформамидом. Бумага закрепляется в приборе (герметически закрывающемся ящике) и хроматографируется исходящим способом в течение 12–15 часов. Растворитель: циклогексан+диметилформамид. При необходимости в ту же камеру можно поместить несколько листов бумаги. На один лист бумаги наносится 140–160 мг сырого экстракта.
После хроматографирования бумага подсушивается на воздухе, от нее по вертикали отрезается узкая полоска и опрыскивается диазотированным пнитроанилином. При этом проявляются три окрашенные в оранжевый цвет зоны КБД, КБН и ТГК. Все фенолокислоты остаются на линии старта. Прикладывая проявленную полоску к листу бумаги, вырезают из него соответственно четыре полосы, причем каждая полоса отдельно разрезается на мелкие кусочки, загружается в колбочку и элюируется при небольшом нагревании метанолом (или этанолом). Если одновременно проводилось хроматографирование на нескольких листах бумаги, то все полосы элюируются суммарно. Обрезки бумаги трижды заливаются небольшими порциями растворителя, который фильтруется через стеклянный фильтр, объединяется в сборную колбу и концентрируется. Наши наблюдения показывают, что каннабиноиды лучше хранить в растворе, при этом они не так быстро осмоляются.
Из 140 мг сырого экстракта гашиша, нанесенного на один лист бумаги, в нашем опыте было получено 40 мг КБД, 20 мг КБН и 20 мг ТГК.
Остающиеся на стартовой липни фенолокислоты целесообразно накапливать и после термического декарбоксилирования (при 110° в течение 15 мин. непосредственно на бумаге) проводить элюирование, как описано выше, и элюат присоединят к очередной партии сырого экстракта, предназначенного для разделения.
Если работа по разделению предпринята с целью накопления наиболее активного психотропного соединения (ТГК), то фракцию соответствующую КБД, элюируют и подвергают в спиртовом же растворе кислотной изомеризации (нагревают 0,5 % НС1 в течение 1 часа), затем продукт реакции добавляют к очередной порции экстракта из гашиша, подлежащего разделению. Таким образом, повышают общий выход изомеров ТГК.
Достоинствами предлагаемого нами метода являются простота и доступность. К недостаткам следует отнести трудоемкость и длительность проведения эксперимента. Кроме того, таким путем удается выделить из гашиша только главные компоненты. Полученные вещества не лишены примесей фенольных соединений, находящихся в гашише в небольших количествах. Тем не менее, полученные каннабиноиды вполне пригодны в качестве свидетелей в различных видах хроматографии. Суммарная фракция ТГК может быть использована для изучения психотропной активно-
5.4 Метод противоточного распределения
Мы применили в несколько модифицированном виде методику Кортэ с сотрудниками для выделения важнейших компонентов гашиша.
Высушенные на воздухе листья конопли (110 г) исчерпывающе экстрагировались метанолом. Экстракт растворили в бензоле и пропустили через слой дезактивированной окиси алюминия (500 г). Фракции, дающие положительную реакцию на фенолы, объединили и упарили (15,7 г). Каплю масла хроматографировали на бумаге, как описано выше, подтвердили наличие трех главных каннабиноидов и суммы фенолокислот. Суммарный экстракт в трех количественных вариантах (1,5 г; 3,2 г; 10 г) помещали в автоматический прибор Крейга с 200 ячейками емкостью 20/20 мл каждая. Распределение проводилось в системе метанол — петролейный эфир — вода (10:9:1). Предварительно растворители перемешивались: нижний слой ис пользовался для заполнения всех ячеек, верхний — порциями вводился в прибор, где происходило последовательное смешивание, расслоение и разделение жидкостей с одновременным распределением веществ. Сумма каннабиноидов, растворенная в петролейном эфире, заливалась в первую ячейку.
